第四节 精子的生活力
四、外界因素对精子存活的影响
外界很多因素影响精子的代谢和生活力,有些因素刺激精子,促进其活力和代谢,但使精子的生存时间和寿命缩短;有些因素有抑制精子活力的作用,从而使精子的生存时间延长;另有一些因素能直接杀死精子。在实际生产中,开展人工授精时应防止有害因素,正确利用有利因素,使精子保存在合适的环境之中,延长其保存时间。
(一)温度
最适合精子运动和代谢的温度是动物的体温,哺乳动物是37~38℃、鸟类40℃。
1.高温
高温使精子的代谢和活力增强,消耗能量加快,促使精子在短时间内死亡。精细胞0~10℃范围内,它的代谢、运动力很低,是维持生命的最好温区,所以在冷冻保存精液技术开发以前,精子体外保存的最合适的温度是0~10℃。在20~40℃是检查精子活力的温度范围。40℃以上的高温,精子代谢、运动异常增进。假如温度进一步升高,原生质即发生凝固、蛋白质发生变性而死亡,精子死亡的温度范围认为是54.5~56℃。
高温的环境(32~40℃)影响精子在睾丸内的生存,可使睾丸精细管退化,精液品质下降。我国南方夏季温度长期超过25℃以上后,牛、猪、兔等的精液质量都明显差,活力下降、畸形率增加、密度变稀,以至不能用于人工授精或制作冷冻精液。
2.低温
低温使精子的代谢能力降低,活动力减弱。慢慢将精液的温度下降至O℃,对精子的存活力没有不良的影响。所以在人工授精中,将精液从体温状态下降至0~15℃下保存时必须缓慢进行。
将新鲜的精液突然由体温急剧降至10℃以下时,能使精子很快失去活力,而且不能复苏,这种情况称为冷休克。其原因是精子细胞膜受到破坏,因而使三磷酸腺苷、细胞色素、钾等从细胞膜破坏处滑出,精子的渗透压增加,产生不可逆的变化以至损害其结构和活动力。
牛精子保存在5~21℃与21~37℃相比较,糖酵解耗氧量显著降低。精液温度急剧下降对精子的代谢、活力、受精能力都有不可逆的不良影响。如给牛和绵羊精子以低温打击,糖酵解几乎完全停止,呼吸能力下降,精子表面膜受损伤,通透性增加,细胞膜内的部分蛋白质也受到损伤。白山等(1950)试验,将牛、猪精子突然降温至29℃以下,结果活力、存活率、糖酵解能力都下降,与没有打击前相比差异很大。猪与牛相比低温冲击的有害影响更为显著。
3.超低温 -196℃液氟超低温保存精子,可使精子的代谢和活动力基本停止,因此可以长期保存。
0℃~60℃是对精子生存不利的温区,-15℃-25℃是最有害的危险温区。-60℃以下的超低温,水分子的移动受到限制,对细胞的有害程度减少。活细胞在冷冻过程中的损伤主要是冰晶的形成引起。冰晶生存的温度范围为0℃~30℃。要使在这一温区不形成冰晶就必须以很快的降温速度通过这一温区,在降温过程中,要让水不形成冰晶,而过度到玻璃化状态,可以保护精子免受冻害。
(二)光线和辐射
对人、家兔、鸡等动物的精子进行1分钟~3分钟日光照射,能显著促进呼吸;进行1小时以上照射,精子的存活时间显著缩短。其原因是精子的细胞色素对光具有感受性,由于光的刺激促进氧化。产生代谢中间产物H2O2,所以对精子有害。
X射线对精子的活力、代谢和存活力有影响。用200γ~800γ的低剂量的射线处理老鼠、家兔、鸡精子,可使受精能力消失。
(三)pH值
pH值影响精子的代谢和活动力,精子呼吸的适宜pH范围,人:7.4~7.8、牛:6.9~7.O、绵羊:7.0~7.2、猪:7.2~7.5、家兔:6.8、鸡:7.3。偏酸的环境,精子运动、代谢能力减弱,但维持生命的时间延长;偏碱的环境,精子活动能力和代谢能力提高,但精子的存活时间显著缩短。
精子能适应的pH范围,因动物种类不同而有差异。一般能适应的范围,家兔精子5.0~8.8、牛精子5.O~8.O。
(四)渗透压
精子应与周围环境如精清或稀释液保持基本上等渗,如果精液或稀释液的渗透压高,易使精子本身的水分脱出,造成精子皱缩;如果精清和稀释部分的渗透压低,水分就会渗入精子体内,使精子膨胀。精子对渗透压有逐渐适应的能力,这是通过细胞膜使精子内外渗透压缓慢地趋于平衡的结果,但这种适应性有一定的限度。
渗透压的异常会损害精子的代谢和活力。对牛、绵羊、狗精子,低渗液比高渗液的影响严重,而家兔精子在中性或酸性的低渗液中影响更大。
(五)离子浓度
离子浓度影响精子的代谢和运动,一般阴离子对精子的损害力大于阳离子。
1.阳离子
在哺乳动物精子中K+比Na+含量高,而在精清中则相反。精清中少量的K+能促进精子的呼吸、糖醇解和运动;但高浓度K+对精子的代谢和运动有抑制作用。Ca2+对牛精子的作用,存在两种不同意见。有人认为Ca2+抑制呼吸和糖酵解,阻碍运动;有人认为Ca2+对精子的代谢运动有促进作用。鸡精子在含K+、Mg2+的溶液中活力好。Mg2+能促进牛、狗精子的活动力。Mn2+对精子的呼吸、糖酵解、运动有抑制作用。其它微量的重金属元素,如Zn2+是醇的成分,Fe2+是色素的组成部分,对精子的代谢和活力的维持起重要作用,但量过多对精子的生存有毒害作用。Fe2+和Cu2+对绵羊、牛和家兔的精子有害,特别是Cu2+对绵羊精子,Ca2+对人的精子毒性最显著。Co2+、Ni+的复合物对精子的毒性较弱,Cu2+、Zn2+、Ca2+复合物的毒性最强。
2.阴离子
Cl-在动物精液中含量多,与Na+一起主要维持渗透压,0.9%NaCl溶液是对精子较适宜的生理溶液。HCO3-能促进精子在有氧条件下的代谢和呼吸。但HCO3-和PO43ˉ共同存在时能抑制精子的呼吸和运动。
PO43ˉ配制的磷酸缓冲液作为稀释液在过去已广泛应用,但高浓度的PO43-能抑制人、牛、绵羊精子的呼吸和运动。SO42ˉ对精子的代谢没有影响。柠檬酸离子、Cl-、CO32-、Br-、I-等离子对精子有害。
(六)稀释
哺乳动物精子射出后在精液中能活泼运动,经适当的稀释后活力更好,精子的代谢和耗氧量增加。有研究认为,超过1.8倍稀释后从精子内渗出K+、Mg2+、Ca2+,而Na+向精子内移动,但这种代谢性的变化因稀释液的种类而不同。精液经高倍稀释,对精子的存活力、受精能力都有不良影响,这是因为高倍稀释后,覆盖在精子表面的膜发生变化;使细胞的通
透性增大,细胞内的各种成分向外渗出,而外界的离子向精子内部入侵,给代谢和生存能力带来影响。在稀释液中加卵黄,可以减少高倍稀释的有害影响。
(七)气相
氧对精子的呼吸是必不可少的。精子在有氧的环境中,能量的消耗增加,CO2积累增多,但在缺氧的情况下,CO2积累能抑制精子的活动。在100%CO2的气相条件下,精子的直线运动停止。若用氮活氧代替CO2,精子的运动可以得到恢复。另外25%以上的CO2可抑制牛、山羊和猪精子的呼吸和分解糖的能力。
(八)药品的影响
另有一些因素也能影响精子的活力和存活力。向精液或稀释液中加抗生素、磺胺类药物,能抑制精液中的病原微生物的繁殖,从而延长精子的存活时间。在稀释液中加入甘油后冷冻精液,对精子具有防冻保护作用,可以提高精子复苏率。精子的有氧代谢还受激素的影响,胰岛素能促进糖酵解,甲状腺素能促进牛精子对氧的消耗、果糖对及葡萄糖的分解。睾酮、雄烯二酮、孕酮等能抑制绵羊精子的呼吸,在有氧条件下能促进糖酵解。
有些药品能抑制精子和杀死精子,如酒精等一些消毒药品能直接杀死精子。